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大鼠Bcl-2相關(guān)X蛋白（BAX）試劑盒操作原理
發(fā)布時(shí)間： 2016-01-27 點(diǎn)擊次數(shù)： 2731次大鼠Bcl-2相關(guān)X蛋白（BAX）試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本中大鼠Bcl-2相關(guān)X蛋白（BAX）水平。用純化的大鼠Bcl-2相關(guān)X蛋白（BAX）抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入Bcl-2相關(guān)X蛋白（BAX），再與HRP標(biāo)記的Bcl-2相關(guān)X蛋白（BAX）抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過(guò)*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的。顏色的深淺和樣品中的Bcl-2相關(guān)X蛋白（BAX）呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度（OD值），通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中大鼠Bcl-2相關(guān)X蛋白（BAX）濃度。
大鼠Bcl-2相關(guān)X蛋白（BAX）試劑盒操作步驟
1. 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋：本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀釋。
2. 加樣：分別設(shè)空白孔（空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測(cè)樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50μl，待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測(cè)樣品10μl（樣品zui終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻。
3. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
4. 配液：將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用
5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。
6. 加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50μl，空白孔除外。
7. 溫育：操作同3。
8. 洗滌：操作同5。
9. 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.
10. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)）。
11. 測(cè)定：以空白空調(diào)零，450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度（OD值）。 測(cè)定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。
保存條件及有效期
1．試劑盒保存：；2-8℃。
2．大鼠Bcl-2相關(guān)X蛋白（BAX）試劑盒有效期：6個(gè)月